高致病性禽流感疫情处置技术规范（试行）
农业部
农业部文件
农政发[2004]1号
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各省、自治区、直辖市农业、农垦、畜牧、渔业、乡镇企业、农机化厅（局、委），新疆生产建设兵团农业局：
《高致病性禽流感疫情处置技术规范（试行）》已经2004年2月2日农业部第7次常务会议审议通过，现印发你们，请遵照执行。
二○○四年二月三日
高致病性禽流感疫情处置技术规范（试行）
第一项 样品采集、保存及运输技术规范
采集、保存和运输样品应当符合下列要求，并填写采样单。
一、样品采集
（一）病禽
1．至少从5只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子（置于缓冲液中）各5个（小珍禽可采集新鲜粪便）；气管和肺的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品（不能混样）各5个。
2．分别采集至少10个病鸡的血样（急性发病期血清）。
（二）病死禽
无发病禽时，可从死亡不久的病禽采样，采样要求同病禽。
棉拭子单独放入容器，容器中盛放含有抗菌素的pH值为7.0-7.4的 PBS液。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中加入青霉素（2000IU/mL）、链霉素（2mg/mL）、庆大霉素（50μg/mL）、制霉菌素（10000 IU/mL）。但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后pH值应调至7.0-7.4。
二、样品保存和运输
血样要单独存放，不能混合。
样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密封，防止渗漏。
样品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输。否则，应冷冻运输。
若样品暂时不用，则应冷冻（最好-70℃或以下）保存。
采样单
样品名称
样品编号
采样基数
采样数量
采样日期
保存情况
冷冻（藏）
被采样单位
通讯地址
联系电话
邮编
被采样单位盖章或签名
年 月 日
采样单位盖章 采样人签名
年 月 日
备注：
此单一式三份，第一联存根，第二联随样品，第三联由被采样单位保存
第二项 血清学诊断技术规范
一. 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术
(一)材料准备
1. 96孔V型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。
2. 阿氏（Alsevers）液、鸡红细胞悬液，配制方法见附录A。
3. pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）。
4. 高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
(二) 操作方法
1. 血凝（HA）试验（微量法）
（1） 在微量反应板的1-12孔均加入0.025mL PBS，换滴头。
（2） 吸取0.025mL抗原加入第l孔，混匀。
（3） 从第1孔吸取0.025mL抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃之，换滴头。
（4） 每孔再加入0.025mL PBS。
（5） 每孔均加入0.025mL 1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
（6） 振荡混匀，在室温（20℃-25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下1hr）。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。
（7） 结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
2. 血凝抑制（HI）试验（微量法）
（1） 根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
（2） 在微量反应板的1-11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。
（3） 吸取0.025mL血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。
（4） 1-11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025mL，室温（约20℃）静置至少30min。
（5） 每孔加入0.025mL的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1hr），对照红细胞将呈显钮扣状沉于孔底。
（三）结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于21og 2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价等于41og 2为阳性。
二. 琼脂凝胶免疫扩散（AGID）试验
(一) 材料准备
1. 硫柳汞溶液、pH7.2的0.01mol/L PBS溶液，配制方法见附录B。
2. 琼脂板：制备方法见附录C。
3. 禽流感琼脂凝胶免疫扩散抗原、标准阴性和阳性血清。
（二） 操作方法
1. 打孔。在制备的琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径约5mm，孔距2mm-5mm，将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插入，轻轻向左侧方向将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。
2. 封底。用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要溶化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
3. 加样。用微量移液器或带有6～7号针头的0.25mL注射器，吸取抗原悬液滴入中间孔(图1的⑦号)，标准阳性血清分别加入外周的①和④孔中，被检血清按编号顺序分别加入另外4个外周孔（图1的②，③，⑤，⑥号孔）。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个滴头。
4. 作用。加样完毕后，静置5min～10min，然后将平皿轻轻倒置放入湿盒内，37℃温箱中作用，分别在24h、48h和72h观察并记录结果。
（三） 结果判定
1. 判定方法。将琼脂板置日光灯或侧强光下观察，若标准阳性血清(图1的①和④号孔)与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，则试验成立。
2. 判定标准
(1) 若被检血清孔（如图1中的②号）与中心抗原孔之间出现清晰致密的沉淀线，且该线与抗原与标准阳性血清之间沉淀线的末端相吻合，则被检血清判为阳性。
(2) 被检血清孔（如图1中的③号）与中心孔之间虽不出现沉淀线，但标准阳性血清孔（如图1中的④号）的沉淀线一端向被检血清孔内侧弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性（凡弱阳性者应重复试验，仍为弱阳性者，判为阳性）。
(3) 若被检血清孔（如图1中的⑤号）与中心孔之间不出现沉淀线，且标准阳性血清沉淀线直向被检血清孔，则被检血清判为阴性。
(4) 被检血清孔（如图1中的⑥号）与中心抗原孔之间沉淀线粗而混浊或标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸，被检血清孔为非特异反应，应重做，若仍出现非特异反应则判为阴性。
①
⑥ ②
⑦
⑤ ③
④
图1 AGP试验结果
附 录 A
HA和HI试验用溶液的配制
1．阿氏（Alsevers）液配制
葡萄糖 2.05g
柠檬酸钠 0.8g
柠檬酸 0.055g
氯化钠 0.42g
加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
2．1%鸡红细胞悬液制备
采集至少3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH7.2的0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS配成1%（V/V）红细胞悬液，4℃保存备用。
附 录 B
AGP试验用溶液的配制
1．1%硫柳汞溶液的配制
硫柳汞 1.0g
加蒸馏水至 100mL
溶解后，置100mL瓶中盖塞存放备用。
2． pH7.2的0.01mol/L PBS 的配制
（1）配制25×PB：称量2.74g磷酸氢二钠和0.79g二水磷酸二氢钠加蒸馏水至100mL。
（2）配制1×PBS：量取40mL25×PB，加入8.5g 氯化钠，加蒸馏水至1000mL。
（3）用氢氧化钠或盐酸调pH至7.2。
（4）灭菌或过滤。
（5）PBS一经使用，于4℃保存不超过3周。
附 录 C
琼 脂 板 的 制 备
称量琼脂糖1.0g，加入100mL的pH7.2的0.01mol/L PBS液，在水浴中煮沸使之充分融化，加入8g氯化钠，充分溶解后加入1%硫柳汞溶液1mL，冷至45℃-50℃时，将洁净干热灭菌直径为90mm的平皿置于平台上，每个平皿加入18mL-20mL，加盖待凝固后，把平皿倒置以防水分蒸发，放普通冰箱中保存备用（时间不超过2周）。
第三项 高致病性禽流感诊断标准
一、诊断指标
（一） 临床诊断指标
1．急性发病死亡；
2．脚鳞出血；
3．鸡冠出血或发绀、头部水肿；
4．肌肉和其他组织器官广泛性严重出血。
（二） 血清学诊断指标
1．H5或H7的血凝抑制(HI)效价达到24及以上；
2. 禽流感琼脂免疫扩散（AGP）试验阳性(水禽除外)。
（三） 病原学诊断指标
1．H5或H7亚型病毒分离阳性；
2．H5或H7 特异性分子生物学诊断阳性；
3. 任何亚型病毒静脉内接种致病指数（IVPI）大于1.2。
二、结果判定
（一） 临床怀疑为高致病性禽流感
符合临床诊断指标1，且至少有临床诊断指标2、3、4之一。
（二） 疑似高致病性禽流感
符合结果判定（一），且符合血清学诊断指标1或/和2。
（三） 确诊
符合结果判定（二），且至少符合病原学诊断指标1、2、3之一。
第四项 封锁技术规范
一、由所在地畜牧兽医行政管理部门划定疫点、疫区、受威胁区。
二、封锁令的发布：畜牧兽医行政管理部门报请本级人民政府对疫区实行封锁，人民政府在接到报告后，应立即做出决定。决定实行封锁的，发布封锁令。
三、封锁的实施：当地人民政府组织对疫区实施封锁。在疫区周围设置警示标志，在出入疫区的交通路口建立临时性检疫消毒站，指派专人，配备消毒设备，禁止易感染活禽进出和易感染禽类产品运出，对出入人员和车辆进行严格消毒。
四、封锁令的解除：疫区内所有禽类及其产品按规定处理后，经过21天以上的监测未出现新的传染源，且受威胁区病原检测阴性，经动物防疫监督人员审验合格后，由当地畜牧兽医行政管理部门向发布封锁令的人民政府申请解除封锁。
第五项 扑杀技术规范
扑杀活禽可采取如下方法：
一、窒息
先将待扑杀禽装入袋中，置入密封车或其它密封容器，通入二氧化碳窒息致死；或将禽装入密封袋中，通入二氧化碳窒息致死。
二、扭颈
扑杀量较小时采用。根据禽只大小，一只手握住头部，另一只手握住体部，朝相反方向扭转拉伸。
三、其它
也可根据本地情况，采用其它能避免病原扩散的致死方法。
第六项 无害化处理技术规范
所有病死禽、被扑杀禽及其产品、排泄物以及被污染或可能被污染的垫料、饲料和其他物品应当进行无害化处理。
无害化处理可以选择深埋、焚化、焚烧等方法，饲料、粪便也可以发酵处理。
一、深埋
1．深埋点应远离居民区、水源和交通要道，避开公众视野，清楚标示。
2．坑的覆盖土层厚度应大于1.5米，坑底铺垫生石灰，覆盖土以前再撒一层生石灰。坑的位置和类型应有利于防洪。
3．禽鸟尸体置于坑中后，浇油焚烧，然后用土覆盖，与周围持平。填土不要太实，以免尸腐产气造成气泡冒出和液体渗漏。
4．饲料、污染物等置于坑中，喷洒消毒剂后掩埋。
二、焚化、焚烧
1．疫区附近有大型焚尸炉的，可采用焚化的方法。
2．处理的尸体和污染物量小的，可以挖1.5米深的坑，浇油焚烧。
三、发酵
饲料、粪便可在指定地点堆积，密封发酵。
以上处理应符合环保要求，所涉及到的运输、装卸等环节要避免洒漏，运输装卸工具要彻底消毒。
第七项 疫区清洗消毒技术规范
一、成立清洗消毒队
清洗消毒队应有一名专业技术人员指导。
二、设备和必需品
（一）清洗工具：扫帚、叉子、铲子、锹和冲洗用水管。
（二）消毒工具：喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒容器等。
（三）消毒剂：醛类、氧化剂类、氯制剂类、双季胺盐类等合适的消毒剂。
（四）防护装备：防护服、口罩、胶靴、手套、护目镜等。
三、养禽场清理、清洗和消毒
（一）首先清理污物、粪便、饲料、垫料等。
（二）对地面和各种用具等彻底冲洗，并用水洗刷禽舍、车辆等，对所产生的污水进行无害化处理。
（三）养禽场的金属设施设备的消毒，可采取火焰、薰蒸等方式消毒。
（四）养禽场圈舍、场地、车辆等,可采用消毒液喷洒的方式消毒。
（五）养禽场的饲料、垫料等作深埋、发酵或焚烧处理。
（六）粪便等污物作深埋、堆积密封发酵或焚烧处理。
（七）疫点内办公区、饲养人员的宿舍、公共食堂、道路等场所，要喷洒消毒。
（八）污水沟可投放生石灰或漂白粉。
四、交通工具清洗消毒
（一）出入疫点、疫区的交通要道设立临时性消毒点，对出入人员、运输工具及有关物品进行消毒。
（二）疫区内所有可能被污染的运载工具应严格消毒，车辆的外面、内部及所有角落和缝隙都要用清水冲洗，用消毒剂消毒，不留死角。
（三）车辆上的物品也要做好消毒。
（四）从车辆上清理下来的垃圾和粪便要作无害化处理。
五、家禽市场和笼具的清洗消毒
（一）用消毒剂喷洒所有区域。
（二）饲料和粪便等要深埋、发酵或焚烧。
（三）刮擦和清洗笼具等所有物品，并彻底消毒。所产生的污水要作无害化处理。
六、屠宰加工、贮藏等场所的清洗消毒
（一）所有家禽及其产品都要深埋或焚烧。
（二）禽舍、笼具、过道和舍外区域要清洗，并用消毒剂喷洒。
（三）所有设备、桌子、冰箱、地板、墙壁等要冲洗干净，用消毒剂喷洒消毒。
（四）所用衣物用消毒剂浸泡后清洗干净，其他物品都要用适当的方式进行消毒。
（五）以上所产生的污水要作无害化处理。
第八项 散养户养殖场地和禽舍消毒技术要求
一、扑杀鸡鸭等禽鸟后，场地必须清洗消毒。
二、在清洗消毒之前要穿戴好防护衣物。
三、禽舍中的粪便应彻底清除，院子里散落的禽粪应当收集，并作堆积密封发酵或焚烧处理。
四、清理堆积禽粪时应淋水，不得扬起粪尘。
五、用消毒剂彻底消毒场地和禽舍，用过的个人防护物品如手套、塑料袋和口罩等应销毁。
六、可重复使用的物品须用去污剂清洗两次，确保干净。
七、将扑杀时穿过的衣服用70℃以上的热水浸泡5分钟以上，再用肥皂水洗涤，在太阳下晾晒。
八、处理污物后要洗手、洗澡。
第九项 扑杀禽鸟工作人员防护技术要求
一、穿戴合适的防护衣物
（一）穿防护服，或者穿长袖手术衣再加一件防水围裙。
（二）戴可消毒的橡胶手套。
（三）戴N95口罩或标准手术用口罩。
（四）戴护目镜。
（五）穿可消毒的胶靴，或者一次性的鞋套。
二、洗手和消毒
（一）密切接触感染禽鸟的人员，要用肥皂洗手。
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济宁市人事系统工作创新奖励试行意见
山东省济南市人事局
济宁市人事系统工作创新奖励试行意见
济人字〔2007〕26号
为深化“三学三创”和“创建高绩效机关”活动，进一步优化人事人才和机构编制工作发展环境，加快建设服务人事、阳光人事、创新人事、法治人事、效能人事、和谐人事，努力为政府部门和公务员队伍作表率，制定本意见。
一、指导思想
坚持以邓小平理论和“三个代表”重要思想为指导，以服务经济社会发展为目标，不断创新人事人才和机构编制工作的观念、体制机制和环境，积极营造鼓励先进、鞭策后进、鼓励创新、宽容失误的良好氛围，充分调动和激发广大人事干部的工作积极性、主动性和创造性，提高人事部门服务中心服务大局服务群众的水平，为建设产业发达、城乡秀美、文化繁荣、民生殷实、社会和谐的新济宁提供坚强的人事编制保障和人才智力支持。
二、评选范围和标准条件
（一）参评对象范围。市、县（市、区）人事部门和市直各部门、各大企业、各高等院校人事机构及其工作人员，均可以集体或个人的名义申报参评人事工作创新奖。
（二）参评成果范围。参评成果是指在人事人才和机构编制工作理论与实践中取得的推进创新发展的成果。（1）参评成果的认定时间一般应为本评选年度，其中文字类以发表或出版时间为准，非文字类以相关证明材料的时间为准。（2）两人以上合作的成果，不能以一个人的名义申报，必须经共同合作者协商同意后，以共同作者具名申报；如一作者出示让权申报证明，可以由另一作者申报参评。（3）个人在从事人事人才和机构编制工作期间完成的成果，如果本人已经调离人事人才和机构编制工作岗位，不再参加评选。（4）与市外人员的合作成果，其中我市人员为首位的，可进行申报。（5）凡存在知识产权争议或其他争议的成果，不得进行申报。
（三）奖项设置和评选标准条件。工作创新奖设一等奖1名、二等奖2名、三等奖5名和优秀奖若干名。凡在人事人才和机构编制工作理论、管理、技能等方面大胆探索和实践或提出合理化建议，有效地提高了工作质量效率和服务水平的，均可参加评选。
1、评选一等奖应具备下列条件之一：在全国、全省人事系统处于领先地位；被省级以上党委、政府或国家人事部门领导批示肯定；在全国会议或年度全省人事工作会议上作典型发言；被国家级媒体重点推介；获得省级以上创新、科技等综合类奖项；理论或方法在全国、全省人事系统内具有显著的进步，推广应用后取得重大效益。
2、评选二等奖应具备下列条件之一：在全省人事系统处于前列；被市级党委、政府或省级人事部门领导批示肯定；在全省单项人事业务工作会议或全市人事工作会议上作典型发言；被省级媒体重点推介；获得市级创新、科技等综合类奖项；理论或方法在全省人事系统内有较大进步，推广应用后取得显著效益。
3、评选三等奖应具备下列条件之一：在全市人事系统处于领先地位；被县级党委、政府或市级人事部门领导批示肯定；在全市单项人事业务工作会议上作典型发言；被市级以上人事报刊（内刊）重点推介；获得县级创新、科技等综合类奖项；理论或方法在市内处于前列，推广应用后取得较好效益。
4、评选优秀奖应具备下列条件之一：在全市人事系统处于前列；受到市级人事部门领导肯定；在本地、本部门会议或市级人事报刊（内刊）进行推介；理论或方法推广应用后对工作起一定促进作用。
三、评选办法
工作创新奖每年度组织一次，一般结合年度考核进行。一、二、三等奖可以空缺或减少数量，优秀奖数量由当届评委会根据候选成果情况确定。
（一）组织申报。每年1月20日前，各县（市、区）人事局、市直各部门人事科（处）和市人事局（编办）各科室、单位进行申报。申报材料应包括：《济宁市人事系统工作创新奖申报表》（见附件，一式3份），能够证明本成果的相关原始材料、证明、证书等（一式15份，发表和出版类必须有1份原件）。申报程序：填写申报表；向所在单位（或主管部门）申报；所在单位（或主管部门）对申报成果进行初审；报市人事局评审委员会办公室。
（二）审核。评委会办公室根据规定的范围、标准、条件，对申报的成果进行审核，征求有关领导、专家的意见，确定提交评委会评选的候选成果，并就全市申报和审核汇总情况形成简要汇报材料。
（三）评定。评委会听取关于全市申报和审核汇总情况的汇报；对候选成果按规定的条件和标准进行审议（科技软件类成果可现场演示）；评委会成员以无记名方式投票评分，并按照去掉一个最高分和一个最低分、取其他评委评分平均值的办法，计算各候选成果的最后得分；按得分多少确定受奖成果的等次。
（四）公示。对评委会评定的拟奖励成果，在《济宁日报》人事人才专版或济宁人事信息网公示，公示期为10日。对有异议的，由评委会办公室复核并报评委会同意后进行处理。
（五）颁奖。对公示无异议的获奖成果，由市人事局颁发获奖证书和奖金。各等次奖金的数额为：一等奖2000元、二等奖1000元、三等奖500元、优秀奖200元。集体成果获奖，其证书和奖金授予集体，两个以上集体合作成果获奖，证书发给所有成果申报人，奖金发给第一申报人，由其合理分配；个人成果获奖，其证书和奖金授予个人；两人以上合作成果获奖，证书发给所有成果申报人，奖金发给第一申报人，由其合理分配。
四、奖励结果的管理与使用
获得人事工作创新奖的单位，其负责人享有人事系统评先树优的优先权；获得人事工作创新奖的人事干部，在确定年度考核优秀等次人员和提拔任用时应优先考虑。市人事局对本局机关及所属机构获人事工作创新奖“一等奖”的集体主要负责人或获人事工作创新奖“一等奖”的个人，年度考核直接确定为优秀等次；获奖一年内参加竞争上岗的，其任职年限可适当放宽，笔试原始成绩加5分。
对获奖成果经查实有弄虚作假或其他问题的，取消该项成果的获奖和下届参评资格，已颁发证书、奖金或因此受到其他奖励优惠的全部追回，并在人事系统通报批评。
五、组织领导
为加强对全市人事系统创新奖励工作的领导，成立济宁市人事系统创新奖评审委员会，由有关领导和专家组成。评委会每年一届，其成员可以连任，凡有成果参评的评委会成员不参加当次的评审工作。评委会办公室设在市人事局研究室（政策法规科），负责各项具体组织工作。
二○○七年六月二十三日
